StarLighter SYBR Green qPCR Mix  

   

 

产品简述:

StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。

 

主要应用:

基因表达分析;

低拷贝数基因检测;

基因敲除验证;

基因表达验证;

RNA拷贝数检测(病毒及病菌等检测)。

 

技术特点:

扩增特异性强,数据结果可靠;

反应效率高,Ct值提前;

信噪比高,灵敏度高;

高GC或高AT的片段扩增效果好;

耐受抑制剂能力强。

 

优异表现:

  1. 扩增特异性强,数据结果可靠
   
   
   

Fig1:

  1. 以人的cDNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%(高GC),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
  2. 为qPCR反应后产物的电泳图。

注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,使用此试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。

   
   
   

Fig2:

  1. 以人的cDNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%,分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
  2. 为qPCR反应后产物的电泳图。

注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。

   
   
   

Fig3:

  1. 以人的cDNA为模板,使用引物UBC及不同厂家试剂,扩增长度为123bp的片段, GC%=52.0%(GC 均衡),分别得到StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各竞品的扩增和熔解曲线图;
  2. 为qPCR反应后产物的电泳图。

注:SL-StarLighterSYBR Green qPCR Mix,其余代表不同竞品。使用启衡星试剂得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一、准确。

总结Fig1、Fig2、Fig3如下图(SL为StarLighter SYBR Green qPCR Mix):

   

(2)扩增效率高,梯度稀释线性范围好,低拷贝检测灵敏度高

   

Fig4:

以KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit 中浓度为8.3pM 的标准品作为S1,依次5倍稀释得到(S2-S10)为模板,StarLighter SYBR Green qPCR Mix与竞品KP的扩增及熔解曲线图。

StarLighter SYBR Green qPCR Mix,从S1-S10,扩增效率(Eff=100.483%)好,扩增曲线完美,荧光信号强,熔解曲线单一峰,无非特异性扩增。

(3)荧光信号强,灵敏度高

   

Fig5:

使用市面上个品牌的qPCR试剂得到扩增曲线图,上图为去掉ROX后,各品牌的荧光信号值比较,竞品KP与StarLighter SYBR Green qPCR Mix的荧光信号强度最高。

(4)Ct值提早出现

   

Fig6:

以人DNA为模板,使用引物TR及不同厂家试剂,扩增长度为219bp的片段,GC%=64%;在产物经电泳验证为目的片段的前提下,扩增曲线去Rox校正后,StarLighter SYBR Green qPCR Mix CT值最小(灵敏度最高)。

(5)高GC或高AT的片段扩增效果好

   

Fig7:

以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为399bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=94.365%为最优,竞品TY3,Eff=121.91%,竞品KP,Eff=NA(最高浓度无扩增)。

   

Fig8:

以人的DNA为模板,使用引物hPRT1及不同厂家试剂,扩增长度为198bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=100.868%为最优,竞品TY3,Eff=94.630%,竞品KP,Eff=98.334%。

   

Fig9:

以人的DNA为模板,使用引物β-actin及不同厂家试剂,扩增长度为290bp的片段,GC%=61.0%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=102.101%为最优,竞品TY3,Eff=110.787%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。

   

Fig10:

以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=101.307%为最优,竞品TY3,Eff=150.097%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。

 

(6)耐受抑制剂能力强

   

Fig11:

以人的DNA为模板,使用引物F8-exon10及不同厂家试剂,扩增长度为393bp的片段,GC%=35.6%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=94.365%为最优,竞品TY3,Eff=121.91%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。

以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。

   

Fig12:

以人的DNA为模板,使用引物ApoE及不同厂家试剂,扩增长度为322bp的片段,GC%=75.5%;从扩增效率上看, StarLighter SYBR Green qPCR Mix ,Eff=101.307%为最优,竞品TY3,Eff=150.097%,竞品KP,Eff= NA(最高浓度无扩增)。

以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA为模板,原始模板浓度为100ng/μl,使用10mM Tris(含0.05%吐温-20)稀释2倍后作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增效率符合要求,竞品TY3及竞品KP的S1模板扩增均受到不同程度的抑制。

(7)保存稳定性

7.1、4℃保存稳定性

   

Fig13:

以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,4℃储存最多达39天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

7.2、常温与37℃保存稳定性

   

Fig14:

以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,常温或37℃储存最多达8天时,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

7.3、冻融稳定性

   

Fig15:

以人的DNA为模板,使用引物UBC,扩增长度为123bp的片段,GC%=52%;从扩增曲线上可以看出,冻融次数最多达35次,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。

7.1、7.2、7.3实验结果均出自ABI7500 Fast机器,使用Fast模式,程序为95℃、5min,40cycles(95℃、30sec,60℃、45sec),加熔解曲线。

7.4、不同机型/程序稳定性

(1)使用ABI QuantStudio6 Flex

   

Fig16:

如上图,使用引物ApoE,扩增长度为322bp的片段, GC%=75.5%;扩增体系与反应程序同7.1、7.2、7.3,默认升温1.9℃/s,降温1.6℃/s。从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=99%.

2)使用ABI 7500 FAST STANDARD 模式

   
  Fig17:如上图,使用引物TR,扩增长度为219bp的片段, GC%=64%;从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=103%.  
   
  Fig18:如上图,使用引物hPRT1,扩增长度为198bp的片段, GC%=37%;从扩增及熔解曲线上可以看出,扩增产物特异性很好,Eff=95%  

 

定量反应(体系、程序参数)

(1)推荐反应体系

   

(2)推荐反应程序

   

 

说明书附件下载:

StarLighter SYBR Green qPCR Mix说明书V1.pdf

StarLighter SYBR Green qPCR Mix

StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。


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