TeloPrime全长cDNA扩增试剂盒V2



TeloPrime试剂盒是基于Lexogen公司独有的帽状结构接头连接反应(Cap-Dependent Linker Ligation,CDLL)和长链反转录技术,对具有帽状结构和poly(A)结构的全长RNA分子具有高度的选择性。TeloPrime可为mRNA转录组提供准确可靠的数据信息,同时也可应用于长读长测序应用。

 


产品优势
特异性选择具有5’-cap和poly(A)尾结构的全长mRNA;
高度优化的第二链合成及全长cDNA(> 2kb)高效扩增;
完美兼容长读长测序平台的文库构建(PacBio/ Nanopore);
一体化(All-in-one)操作流程;
Input量:1ng-2μg total RNA ;
操作流程灵活,可用定制化的引物进行反转录。

 


工作流程
首先通过oligo dT对total RNA进行长链反转录反应,合成全长的cDNA。随后,双链接头5’端突出的C与RNA/cDNA杂交双链的帽状结构反向的G碱基形成非典型的碱基配对,再通过双链特异性连接酶进行连接反应。只有帽状结构存在(如完整的RNA)以及反转录延伸到达mRNA 的5'端时,连接反应才会发生。因此,在第二链合成的过程中,只有5'端标记的,全长的cDNA才会被转化成双链cDNA。全长双链cDNA在PCR反应中使用5'和3'特异性标签PCR引物进行扩增。最后,用5’和3’端标记的特异性引物以及Lexogen最新的,高度优化的TeloPrime V2 PCR流程进行扩增。

Figure 1 | TeloPrime全长cDNA扩增流程。

 


性能表现
与其它制备全长cDNA的方法相比,如Template Switch和Oligo Capping,TeloPrime 对5'帽子结构具有更强的特异性,使得转录起始位点的mapping具有最高的精确度 (Fig. 2)。

Figure 2 | Lexogen的TeloPrime 试剂盒可以实现高精度的转录起始位点(TSS) mapping。在mRNA测序实验中,mRNAs的5'端分别用TemplateSwitch、Oligo Capping及Teloprime的CDLL技术进行标记,获取全长cDNA,并进行文库构建及测序(illumina)。随后将TSS比对到人类基因组上,将积累的TSS read覆盖率与标准化注释的转录本长度绘制成图,分别显示表达量最高的500个基因的TSS mapping信息。

 


说明书附件下载:

Green_NOTE_TeloPrime V2

 

TeloPrime V2 - MSDS文件

 

TeloPrime全长cDNA扩增试剂盒V2说明书

 

TeloPrime全长cDNA扩增试剂盒V2

TeloPrime全长cDNA扩增试剂盒V2 TeloPrime试剂盒是基于Lexogen公司独有的帽状结构接头连接反应(Cap-Dependent Linker Ligation,CDLL)和长链反转录技术,对具有帽状结构和poly(A)结构的全长RNA分子具有


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