SPLIT RNA提取试剂盒



SPLIT RNA提取试剂盒是专门为需要RNA纯化的下游应用特别设计的,如RNA-Seq。它可快速高效的提取出DNA-free的RNA。更重要的,SPLIT无需DNase处理(DNase可能会对RNA造成损害)。SPLIT RNA 提取试剂盒既可以回收总RNA,还可以分别提取大片段的RNA和小片段的RNA。

 


产品优势
可提取从 17 nt 到大于10,000 nt的Total RNA;可以选择性的提取大片段或者小片段的RNA (Cut-off值在150 nt左右);仅需要30分钟;很高的RNA完整性和纯度 (组织:RIN>8,细胞培养物:RIN 10);试验过程无需DNase处理,且保证RNA中无基因组DNA;极佳的提取效率(低投入量,低至0.5mg组织或100个细胞);本试剂盒可用于FFPE样本(样本需经过脱蜡处理);NEW! SPLIT for blood试剂盒可去除人血液样本中的Globin mRNAs。

 


工作流程
SPLIT RNA提取试剂盒可以简单、快捷、可靠地从不同物种(如哺乳动物、植物、昆虫、真菌和细菌)的多种材料(血浆、组织、细胞系)中提取RNA。样品在高盐提取缓冲液下匀浆,既可使RNase失活,又能提高样品的裂解。用酸性的酚-氯仿法抽提RNA,并辅以锁相凝胶管(phase-lock gel tubes),将含RNA的水相与有机相(含DNA和蛋白质)清晰的分离开来。紧接着将RNA组分用硅胶柱纯化回收,既可回收总RNA,也可回收大片段或/和小片段RNA。

Figure 1 | SPLIT/SPLIT血液试剂盒的工作流程。

 


性能表现
用SPLIT RNA提取试剂盒提取的样本适用于所有类型的RNA测序,从miRNAs到长度大于10,000 nt的mRNAs。提取出的RNA样本不含基因组DNA污染,无需经过DNase、热失活或gDNA清除柱等处理,避免RNA降解或片段大小的偏差 (Fig. 2)。

Figure 2 | SPLIT提取出的RNA无基因组DNA污染。 (A) 从小鼠肝脏提取的RNA在甲醛变性琼脂糖凝胶上的电泳结果。TRIzol法提取的对照样本基因组DNA污染明显,而SPLIT试剂盒提取的RNA中无基因组DNA污染。(B) 使用不同的基因组DNA清除方法去除基因组DNA后,用Agilent's TapeStation评估RNA的完整性(200 - 10,000 nt)— SPLIT在RNA完整性和大小无偏差分布方面,比其它方法有更好的表现。

通过使用small RNA markers进行验证,SPLIT RNA提取试剂盒可以从总RNA或small RNA组分中有效回收低至17 nt片段大小的siRNA和miRNA(Fig. 3)。

Figure 3 | 在总RNA或small RNA洗脱过程中,miRNA和siRNA RNA均可以被有效地回收。使用SPLIT试剂盒从小鼠肝脏组织中提取RNA,在组织中混入单链miRNA和双链siRNA markers。提取的产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。第1和第5泳道分别是理论上最大的miRNA和双链siRNA markers 回收量,可进行半定量比较分析。

 


SPLIT血液RNA专用提取试剂盒
SPLIT血液RNA专用提取试剂盒操作流程中,在样品均质化之前先进行红细胞裂解,此举保证从新鲜的人血中提取完整性高的RNA(Fig.4)。而且在不急于提取RNA的情况下,可在红细胞裂解后将样品重悬于抽提缓冲液中,于-80°C下保存长达三个月。

Figure 4 | SPLIT血液RNA专用提取试剂盒可提高RNA质量。安捷伦2100的检测结果,SPLIT血液 RNA提取试剂盒(绿色,RIN 8.7)、无红细胞裂解的常规SPLIT提取方法(蓝色,RIN 7.0)。

 


有效去除人血液中Globin mRNA
增加的红细胞裂解操作,能有效的去除人血中globinmRNA(Fig.5)。

Figure 5 | SPLIT血液RNA试剂盒可以去除> 95%的Globin mRNA。分别用SPLIT和SPLIT 血液RNA专用提取试剂盒从新鲜人血中提取RNA。 用QuantSeq 3'mRNA试剂盒制备RNA文库,测序结果与人类参考基因组进行比对,比对到globin mRNAs的reads百分数如图所示。

 


Globin mRNA去除提高基因检出率
将样本中占主导地位的globin mRNAs去除,可以释放测序空间,提高其他基因的检出率,节省测序成本。

Figure 6 | 使用SPLIT血液RNA专用提取试剂盒提高了基因检出率。分别用SPLIT RNA提取试剂盒(蓝色)和SPLIT血液 RNA提取试剂盒(绿色)进行RNA提取,随后用QuantSeq 3'mRNA(FWD)试剂盒进行文库构建。 A)基因检出图。根据CPM(每百万读数的计数)均一化reads数(阈值> 0.5 CPM)计算检出的基因数。B)分别用SPLIT和SPLIT血液RNA专用提取试剂盒提取样本并制备
文库,用两种文库检测到的基因数目以及重叠情况绘制韦恩图。


 

说明书附件下载:

SPLIT RNA 提取试剂盒说明书-简约版

 

SPLIT RNA提取试剂盒 - MSDS

 

SPLIT RNA提取试剂盒说明书-FFPE样本

 

SPLIT-RNA提取试剂盒说明书-详细版

 

SPLIT提取试剂盒-for-Blood单页

 

SPLIT RNA提取试剂盒

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