Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 是一种含有 40–44个碱基的单链引导 RNA，包含 20个 碱基的恒定区（环状结构域）和 20–24个 碱基的目标特异性区域（前间隔序列结构域）。我们通常推荐使用 21个碱基的前间隔序列结构域，以获得更优活性。所有 Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 都是通过专有化学修饰合成的，这可防止crRNA被细胞核糖核酸酶降解，并进一步提高中靶编辑性能。在与A.s. Cas12a一起使用时，crRNA 通过前间隔序列邻近基序 (PAM) 序列（TTTV，V 代表 A、C 或 G）确定目标区域中的位置。您的Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 将结合到与 PAM 序列相对的DNA链上（图 2）。crRNA 设计中不要包含 PAM 序列。正确crRNA序列的示例如图3所示。

输入 20–24 碱基的目标序列后，订单输入系统将自动添加额外 20 个碱基和必要的修饰，总共 40–44 个 RNA 碱基。这些额外的碱基和修饰是构建一个完整的 Alt-R CRISPR-Cas12a (Cpf1) crRNA 所必需的。该系统还会将最终序列转化为 RNA——请仅在订单输入工具中输入 DNA 碱基（图 1）。

图 1. 如何输入 Cas12a (Cpf1) crRNA 目标序列。 由于 crRNA 可识别并结合与 PAM 位点 TTTV 序列相对的 DNA 链上的 21 个碱基，所以在订购 crRNA 时，请正向输入 PAM 位点下游的 20-24 个碱基，如图所示。仅在订单输入工具中输入 DNA 碱基。如果您是从在线设计工具中粘贴 CRISPR 目标位点，请务必核实核苷酸链的方向正确无误。设计中不要包含 PAM 位点。常见的错误设计示例如划掉的灰色文本所示。PAM = 前间隔序列邻近基序；V = A、C 或 G。

CRISPR 定制引导 RNA

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CRISPR-Cas12a crRNA in tubes

CRISPR-Cas12a crRNA in plates